公布日：2022.05.13
申請日：2022.02.16
分類號：C02F3/34(2006.01)I;C12N1/02(2006.01)I;C12N1/20(2006.01)I;C12R1/025(2006.01)N;C12R1/01(2006.01)N;C12R1/38(2006.01)N;C02F101/34(2006.01)N;
C02F101/38(2006.01)N
摘要
本發(fā)明提供一種復合菌群處理甲維鹽胺化廢水的方法。具體步驟為：A、通過海洋、鹽湖、鹽礦、化工廢水及土壤極端環(huán)境中提供微生物菌株，并建立化工源菌株庫；B、從化工源菌株庫中選取備選菌株進行培養(yǎng)，經(jīng)過多次轉(zhuǎn)接后選取穩(wěn)定生長的菌種，并按照比例構(gòu)建復合菌群IMP。本發(fā)明提供的復合菌群處理甲維鹽胺化廢水的方法，解決了甲維鹽產(chǎn)生的廢水COD高、TN高、毒性大，廢水處理難度高的問題，本發(fā)明采用生物預處理以替代化學高級氧化，不僅可將COD大部分去除，而且能將有機氮全部氨化，實現(xiàn)廢水的高效預處理，為企業(yè)活性污泥系統(tǒng)降低處理負擔。
權(quán)利要求書
1.一種復合菌群處理甲維鹽胺化廢水的方法，具體步驟為：A、通過海洋、鹽湖、鹽礦、化工廢水及土壤極端環(huán)境中提供微生物菌株，并建立化工源菌株庫；B、從化工源菌株庫中選取備選菌株進行培養(yǎng)，經(jīng)過多次轉(zhuǎn)接后選取穩(wěn)定生長的菌種，并按照比例構(gòu)建復合菌群IMP；C、將甲維鹽胺化廢水稀釋6倍，控制HRT為4d，DO>2mg/L，水溫30‑35℃，復合菌群IMP種子液按照30％的接種量接種，通過攪拌系統(tǒng)攪拌，并添加營養(yǎng)物質(zhì)，菌種處理池pH值控制在6.0‑7.0；D、每天監(jiān)測廢水的基本水質(zhì)數(shù)據(jù)，直至廢水中TN和COD值不再發(fā)生變化；步驟B中建復合菌群IMP的構(gòu)建方法具體為：a、從化工源菌株庫中選取生長周期在3d內(nèi)、培養(yǎng)溫度在25‑35℃、培養(yǎng)基簡單的菌株作為備選菌株，并置于無菌96孔板中采用LB培養(yǎng)基活化；b、將甲維鹽胺化廢水稀釋6倍，經(jīng)0.22μm膜進行過濾除菌后再分裝于無菌96孔板內(nèi)，將活化后的備選菌株按照1％接種于甲維鹽胺化廢水中，在30℃下培養(yǎng)3d；c、培養(yǎng)結(jié)束后，用酶標儀測定96孔板中菌株OD600值，選取OD600＞0.5作為目標菌株，目標菌株經(jīng)過多次轉(zhuǎn)接后，選取仍能穩(wěn)定生長的菌種作為待測菌株；d、待測菌株分別用LB培養(yǎng)基進行活化，將處于對數(shù)期的新鮮菌液在6000r/min條件下離心5min獲得菌體，用0.9％的生理鹽水洗滌2次，再用無菌蒸餾水以重懸菌體，獲得OD600＝1.0的種子液，取100mL已調(diào)節(jié)完營養(yǎng)的甲維鹽胺化廢水裝于250mL錐形瓶中，并將種子液按照10％接種量接種于甲維鹽胺化廢水中，每個菌株設(shè)置3組平行，并設(shè)置不加菌株的對照組均置于150r/min、30℃培養(yǎng)，定期檢測COD值，并選取處理效果好的菌株；e、對在5d內(nèi)COD去除率50％以上的菌種進行16SrRNA基因測序，將測序結(jié)果提交至EzBioCloud數(shù)據(jù)庫進行序列比對，分離出4株具有高效降解效果的菌種分別為JW3、JW6、JW32和JW45；f、將以上4株菌株種子液按照1:1等體積兩兩復配，并將不同復配混合液分別按照總接種量10％接種于已調(diào)節(jié)完營養(yǎng)的甲維鹽胺化廢水中，各體系均置于150r/min、30℃培養(yǎng)，定期檢測COD值，通過不同復配組合對甲維鹽胺化廢水的處理效果，選取復合菌群IMP組成為菌種JW3、JW6和JW32，且比例為1:1:1；所述JW3為Idiomarinaloihiensis，所述JW6為Methylophagaalcalica，所述JW32為Pseudomonasgeniculata，所述JW45為Achromobacterdeleyi。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種復合菌群處理甲維鹽胺化廢水的方法，其特征在于，所述LB培養(yǎng)基的成分為酵母粉5g/L、蛋白胨10g/L和NaCl10g/L。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種復合菌群處理甲維鹽胺化廢水的方法，步驟C中，稀釋6倍的甲維鹽胺化廢水中補充KH2PO40.5g/L，并采用H2SO4調(diào)節(jié)廢水pH＝6.0‑7.0。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明提供一種復合菌群處理甲維鹽胺化廢水的方法，解決了上述的技術(shù)問題。
為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明提供的一種復合菌群處理甲維鹽胺化廢水的方法，具體步驟為：
A、通過海洋、鹽湖、鹽礦、化工廢水及土壤極端環(huán)境中提供微生物菌株，并建立化工源菌株庫；
B、從化工源菌株庫中選取備選菌株進行培養(yǎng)，經(jīng)過多次轉(zhuǎn)接后選取穩(wěn)定生長的菌種，并按照比例構(gòu)建復合菌群IMP；
C、將甲維鹽胺化廢水稀釋6倍，控制HRT為4d，DO>2mg/L，水溫30‑35℃，復合菌群IMP種子液按照30％的接種量接種，通過攪拌系統(tǒng)攪拌，并添加營養(yǎng)物質(zhì)，菌種處理池pH值控制在6.0‑7.0；
D、每天監(jiān)測廢水的基本水質(zhì)數(shù)據(jù)，直至廢水中TN和COD值不在發(fā)生變化。
進一步地，步驟B中建復合菌群IMP的構(gòu)建方法具體為：
a、從化工源菌株庫中選取生長周期在3d內(nèi)、培養(yǎng)溫度在25‑35℃、培養(yǎng)基簡單的菌株作為備選菌株，并置于無菌96孔板中采用LB培養(yǎng)基活化；
b、將甲維鹽胺化廢水稀釋6倍，經(jīng)0.22μm膜進行過濾除菌后再分裝于無菌96孔板內(nèi)，將活化后的備選菌株按照1％接種于甲維鹽胺化廢水中，在30℃下培養(yǎng)3d；
c、培養(yǎng)結(jié)束后，用酶標儀測定96孔板中菌株OD600值，選取OD600＞0.5作為目標菌株，目標菌株經(jīng)過多次轉(zhuǎn)接后，選取仍能穩(wěn)定生長的菌種作為待測菌株；
d、待測菌株分別用LB培養(yǎng)基進行活化，將處于對數(shù)期的新鮮菌液在6000r/min條件下離心5min獲得菌體，用0.9％的生理鹽水洗滌2次，再用無菌蒸餾水以重懸菌體，獲得OD600＝1.0的種子液，取100mL已調(diào)節(jié)完營養(yǎng)的甲維鹽胺化廢水裝于250mL錐形瓶中，并將種子液按照10％接種量接種于甲維鹽胺化廢水中，每個菌株設(shè)置3組平行，并設(shè)置不加菌株的對照組均置于150r/min、30℃培養(yǎng)，定期檢測COD值，并選取處理效果好的菌株；
e、對在5d內(nèi)COD去除率50％以上的菌種進行16SrRNA基因測序，將測序結(jié)果提交至EzBioCloud數(shù)據(jù)庫進行序列比對，分離出4株具有高效降解效果的菌種分別為JW3、JW6、JW32和JW45；
f、將以上4株菌株種子液按照1:1等體積兩兩復配，并將不同復配混合液分別按照總接種量10％接種于已調(diào)節(jié)完營養(yǎng)的甲維鹽胺化廢水中，各體系均置于150r/min、30℃培養(yǎng)，定期檢測COD值，通過不同復配組合對甲維鹽胺化廢水的處理效果，選取復合菌群IMP組成為菌種JW3、JW6和JW32，且比例為1:1:1。
進一步地，所述LB培養(yǎng)基的成分為酵母粉5g/L、蛋白胨10g/L和NaCl10g/L。
進一步地，步驟C中，稀釋6倍的甲維鹽胺化廢水中補充KH2PO40.5g/L，并采用H2SO4調(diào)節(jié)廢水pH＝6.0‑7.0。
進一步地，所述生化預處理池的底部安裝有曝氣系統(tǒng)。
與相關(guān)技術(shù)相比較，本發(fā)明提供的復合菌群處理甲維鹽胺化廢水的方法具有如下有益效果：
本發(fā)明提供一種復合菌群處理甲維鹽胺化廢水的方法，通過復合菌群高效降解效果，解決了甲維鹽產(chǎn)生的廢水COD高、TN高、毒性大，廢水處理難度高的問題，本發(fā)明采用生物預處理以替代化學高級氧化，不僅可將COD大部分去除，而且能將有機氮全部氨化，實現(xiàn)廢水的高效預處理，為企業(yè)活性污泥系統(tǒng)降低處理負擔。
（發(fā)明人：蘇悅;秦彥軍;夏雨;李書峰;王偉;李栩琪;孫聰;徐林）
