申請日2015.09.22

　　公開(公告)日2015.12.23

　　IPC分類號C12N1/21; C12N1/20; C07K14/33; C12R1/145; C12R1/11; C12R1/01; C02F3/34

　　摘要

　　本發(fā)明涉及一種用于城市生活污水處理的微生物制劑及其應用，其中所述活菌中包括巨大芽孢桿菌、反硝化細菌、乳酸菌、短小芽孢桿菌、厭氧梭菌。本發(fā)明還提供一種微生物菌劑的生產方法。本發(fā)明的微生物菌劑，對城市生活污水污泥處理效果明顯，COD平均處理率較高，而且操作方便，可降低后續(xù)污水處理廠的處理成本。

　　權利要求書

　　1.一種微生物菌劑，其由三種微生物組成。

　　2.一種微生物菌劑，其按照重量百分比由如下各組分組成：巨大芽孢桿菌30%、反硝化細菌10%、乳酸菌20%、短小芽孢桿菌25%、厭氧梭菌15%。

　　3.如權利要求2所述的菌劑，其特征在于：所述的厭氧梭菌為轉入了編碼如下任一個蛋白變體的編碼基因的厭氧梭菌菌株,所述蛋白變體為相對于蛋白原始氨基酸序列分別進行如下突變29L/P、40E/R、59L/S、62P/M、85T/S、101E/P、122P/G、147V/H、183L/A、200S/G、219L/P,蛋白原始氨基酸序列參見GenBank：WP_011915169.1。

　　4.如權利要求1-3任一項所述的菌劑在處理城市污水中的應用。

　　5.一種蛋白變體，其特征在于：所述蛋白變體為相對于蛋白原始氨基酸序列分別進行如下突變29L/P、40E/R、59L/S、62P/M、85T/S、101E/P、122P/G、147V/H、183L/A、200S/G、219L/P,蛋白原始氨基酸序列參見GenBank：WP_011915169.1。

　　說明書

　　一種用于城市生活污水處理的微生物制劑及其應用

　　技術領域

　　本發(fā)明涉及微生物領域，更具體地說，涉及一種處理城市生活污水的微生物制劑及其應用。

　　背景技術

　　城市生活污水的凈化處理在大型城市中越來越受到重視，因為其排放必需達到標準。而處理過程中的成本和安全性是首先要考慮的問題。生活污水的主要特點是含有大量的碳水化合物和氨態(tài)氮，對水質的影響很大，氨增加了水的需氧量，且對水生魚類有毒，如果進入人體，則可削弱人血運輸氧的能力，所以，去除水中的氨態(tài)氮是非常關鍵的。

　　目前國內外城市(鎮(zhèn))污水處理廠普遍采用的工藝有普通活性污泥法、氧化溝法、SBR(間歇式活性污泥)法、A-B法、深井曝氣法等處理來自市政管網的生活污水。這些都是成熟而有效的污水處理工藝，被全世界廣泛應用。

　　由于污水在排入市政管網前未經有效處理，且市政管網污水在排入污水處理廠前也未進行有效處理，造成污水處理廠投資較高，且運行成本巨大。根據已建、在建及擬建污水廠的情況，噸水造價在1500-2000元之間，運行費用在08-1.4元/噸之間。根據這個比例測算我國尚未投入建設的城市污水廠需要一次性投資1000億以上。如果加上市政管網建設,投資將超過2000億元，年運行費在250億元以上。我國的城市污水廠建設資金主要來自各種貸款。如果每年有200億元用于城市污水建設，每個項目的平均還貸期10年,數年后平均每年償還本息將超過300億元,僅運行費用及本息將占我國GDP的1%以上。如此龐大的投資及運行費用，在經濟尚不發(fā)達的我國是不堪重負的，可以斷言，目前這種污水處理廠的建設方式，三年后，污水處理廠將成為政府的沉重的包袱，其中將有30%以上污水廠將因缺乏運轉資金而停運，大批污水處理廠將被閑置。

　　發(fā)明內容

　　本發(fā)明要解決的技術問題在于，針對上述現有污水處理費用昂貴、工藝復雜的缺陷，提供一種進入污水處理廠之前的處理城市生活污水的微生物制劑及其應用。

　　本發(fā)明解決其技術問題所采用的技術方案是：構造一種處理城市生活污水的微生物制劑，每毫升所述微生物菌劑中包含有活菌數2-5X109，其中所述活菌含有巨大芽孢桿菌、反硝化細菌、乳酸菌、短小芽孢桿菌、厭氧梭菌。

　　本發(fā)明所述的城市生活污水的微生物制劑中含有巨大芽孢桿菌、反硝化細菌、乳酸菌、短小芽孢桿菌、厭氧梭菌。

　　本發(fā)明所述的處理化糞池和市政管網污水污泥的微生物菌劑中，所述微生物菌劑通過以下方式培養(yǎng)得到：將原始混合菌群按照重量百分比1%—45%投加到混合培養(yǎng)基中進行混合培養(yǎng)，再通過生化及鏡檢分離優(yōu)化富集培養(yǎng)得到微生物菌劑，其中所述原始混合菌群包括有巨大芽孢桿菌30%、反硝化細菌10%、乳酸菌20%、短小芽孢桿菌25%、厭氧梭菌15%。

　　在本發(fā)明所述的處理城市生活污水的微生物菌劑，投放污水的時間間隔為一天。

　　厭氧梭菌還采用基因工程的方式構建了基因工程菌。利用DNAMAN軟件分析，根據氨基酸序列WP_011915169.1全基因合成所述的核苷酸序列WS基因，通過進行擴增獲得目的片段，PCR擴增獲得目的基因WS(同時通過多重PCR將相應的突變位點29L/P、40E/R、59L/S、62P/M、85T/S、101E/P、122P/G、147V/H、183L/A、200S/G、219L/P引入到基因序列中，從而獲得了不同突變體基因)，用限制性內切酶進行雙酶切PCR產物，與同樣經過雙酶切的表達載體pSDK-1相連，先將pSDK-1導入大腸桿菌中，通過本領域常用的質粒轉移的方式(參見“大腸桿菌磷酸果糖激酶基因在氧化硫硫桿菌中的克隆、表達及其對有機質代謝的分析”中所述的方法，在此不一一表述)將驗證成功的重組質粒從大腸桿菌中轉化進入到所述厭氧梭菌中，獲得了所述的基因工程菌。該工程菌與其余的集中菌株一起組成制劑就有更好的應用前景。

　　本發(fā)明的微生物菌劑，對城市生活污水處理效果明顯，操作方便，可極大的提高排入污水處理廠的水流的質量，降低后續(xù)二級污水處理廠的處理成本。