申請日2015.06.17

　　公開(公告)日2015.12.02

　　IPC分類號C12N1/20; C02F101/38; C12R1/38; C02F3/34

　　摘要

　　一株高效阿特拉津降解菌及其篩選方法以及在農(nóng)田廢水中阿特拉津的生物降解的應(yīng)用，屬于環(huán)境微生物技術(shù)領(lǐng)域，其菌株(Pseudomonas?sp.?ZXY-1)是從吉林化工有限公司農(nóng)藥廠受污染土壤中分離得到，該菌株可以以阿特拉津作為唯一氮源生長，其具有高效降解阿特拉津的能力，10.5小時阿特拉津降解率即可達(dá)99%。菌株P(guān)seudomonas?sp.?ZXY-1的最適生長溫度為25-35℃，最適生長pH為7.0，最適生長搖床轉(zhuǎn)速為150r/min。該菌種適用于農(nóng)田廢水阿特拉津的生物降解與生物修復(fù)。

　　權(quán)利要求書

　　1.一株高效阿特拉津降解菌，其特征在于所述菌株為Pseudomonassp.ZXY-1，于2015年6月1日保藏于“中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心”，保藏編號為CGMCCNo.10936。

　　2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的高效阿特拉津降解菌，其特征在于可應(yīng)用于農(nóng)田廢水中阿特拉津的生物降解及生物修復(fù)。

　　說明書

　　一株高效阿特拉津降解菌及其篩選方法以及在農(nóng)田廢水中阿特拉津的生物降解的應(yīng)用

　　技術(shù)領(lǐng)域

　　本發(fā)明屬于環(huán)境微生物技術(shù)領(lǐng)域，涉及菌株P(guān)seudomonassp.ZXY-1及其在農(nóng)田廢水中阿特拉津的生物降解，可用于農(nóng)藥污染的原位修復(fù)。

　　背景技術(shù)

　　近些年，中國的農(nóng)業(yè)得到了持續(xù)快速的發(fā)展。隨之，農(nóng)藥的使用量逐年增加。在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中，除草劑是一類重要的農(nóng)藥。在不同的除草劑中，阿特拉津因其除草性能好、使用成本低廉等優(yōu)點(diǎn)得到了廣泛的使用。然而，由于缺乏有效的處理技術(shù)，絕大部分阿特拉津在使用過后，會隨著降雨徑流及農(nóng)田退水等途徑直接進(jìn)入自然水體，從而造成嚴(yán)重的水體污染。因此，為了保證水資源的可持續(xù)發(fā)展，我們需要開發(fā)出可高效降解阿特拉津的處理技術(shù)。

　　處理阿特拉津的主要技術(shù)為生物降解法。其中，利用微生物降解阿特拉津因成本低、無二次污染等優(yōu)點(diǎn)具有廣泛的發(fā)展前景。在微生物降解法的發(fā)展中，不僅要篩選出能夠以阿特拉津?yàn)閱我坏孜锏募?xì)菌，更重要的是所篩選的細(xì)菌可直接用于處理含有阿特拉津的實(shí)際廢水。因此，篩選出高效的阿特拉津降解菌并將其應(yīng)用于實(shí)際廢水中，將其轉(zhuǎn)化為無毒無害或低毒低害的物質(zhì)有著重要的意義。

　　發(fā)明內(nèi)容

　　本發(fā)明目的在于在從自然界篩選出高效高產(chǎn)量的阿特拉津降解菌，并將其應(yīng)用于含有阿特拉津的農(nóng)田廢水中，為實(shí)際農(nóng)田廢水中阿特拉津的去除奠定理論基礎(chǔ)。

　　本發(fā)明中一株高效的阿特拉津降解菌，其特征在于為Pseudomonassp.ZXY-1，2015年6月1日保藏于“中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心”，保藏編號為CGMCCNo.10936，北京市朝陽區(qū)北辰西路1號院3號。

　　該菌株為革蘭氏陰性菌，單個細(xì)菌呈桿狀，無芽孢，菌體長為2.27μm，寬為799.76nm;菌株在無機(jī)鹽固定培養(yǎng)基上生長，菌落呈乳白色略帶淡黃色，圓形，不透明，表面光滑略微隆起。該菌株最適生長溫度為25-35℃，最適pH為7.0，最適生長搖床轉(zhuǎn)速為150r/min。

　　本發(fā)明中一株高效的阿特拉津降解菌Pseudomonassp.ZXY-1是從吉林化工有限公司農(nóng)藥廠受污染土壤中分離得到，設(shè)定溫度為30℃，pH7.0篩選，具體篩選步驟如下：

　　(1)取10g農(nóng)藥廠受污染土壤樣品加入100ml含有100mg/L阿特拉津的無機(jī)鹽培養(yǎng)基三角瓶中，設(shè)定轉(zhuǎn)速為150r/min，搖床培養(yǎng)7天，獲得富集菌液。

　　(2)取10ml富集菌液加入100ml含有100mg/L阿特拉津的無機(jī)鹽培養(yǎng)基三角瓶中，重復(fù)此步驟3次。將富集后的菌液進(jìn)行平板涂布，恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)3天后獲得單菌落。

　　(3)挑取步驟(2)中的單菌落進(jìn)行平板三區(qū)劃線，重復(fù)此步驟3次直至平板上出現(xiàn)形態(tài)大小相同的單菌落，即細(xì)菌純化完成。

　　(4)將純菌接入斜面培養(yǎng)基培養(yǎng)3天，4℃保存。

　　其中，無機(jī)鹽培養(yǎng)基為：0.9gKH2PO4，6.5gNa2HPO4.12H2O，3g蔗糖，0.2gMgSO4.7H2O，0.01gFeSO4.7H2O，以及1ml微量元素液溶于1000ml蒸餾水中。無機(jī)鹽固體培養(yǎng)基是在無機(jī)鹽的成分中另加入瓊脂18g/L。

　　斜面培養(yǎng)基為：0.9gKH2PO4，6.5gNa2HPO4.12H2O，3g蔗糖，1g蛋白胨，0.5g酵母粉，1gNaCl，0.2gMgSO4.7H2O，0.01gFeSO4.7H2O，1ml微量元素液以及18g瓊脂溶于1000ml蒸餾水中。

　　微量元素液為：0.1gCoCl2.6H2O，0.425gMnCl2.4H2O，0.05gZnCl2，0.01gNiCl2.6H2O，0.015gCuSO4.5H2O，0.01gNa2MoO4.2H2O，0.01gNa2SeO4.2H2O溶于1000ml蒸餾水中。

　　本發(fā)明中一株高效阿特拉津降解菌為假單胞菌屬(Pseudomonassp.)，經(jīng)過16SrDNA序列測序，其結(jié)果通過Blast程序進(jìn)行同源性比較，該菌株與Pseudomonasalcaliphila的同源性達(dá)99%。

　　本發(fā)明中一株高效阿特拉津降解菌應(yīng)用于含有不同濃度阿特拉津農(nóng)田廢水的生物處理。