申請日2014.09.03
公開(公告)日2015.01.21
IPC分類號C12N1/20; C12N1/16; C12N1/14; C05F17/00; C12R1/645; C12R1/10; C12R1/23; C12R1/72; C12R1/125
摘要
本發(fā)明公開了一種污泥好氧堆肥復(fù)合菌劑的制備方法，該方法將中國工業(yè)微生物菌種保藏管理中心(CICC)保藏的枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis，編號10066)、地衣芽孢桿菌(Bacillus licheniformis，編號10103)、嗜酸乳桿菌(Lactobacillus acidophilus，編號6075)、產(chǎn)朊假絲酵母(Candida utilis，編號31272)、黃孢原毛平革菌(Phanerochaete chrsosporium，編號40719)，經(jīng)過單獨培養(yǎng)后按比例混合接種至發(fā)酵培養(yǎng)基中進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng)得到復(fù)合菌劑。該復(fù)合菌劑接種于污泥好氧堆肥初期，使堆體到達(dá)高溫期的時間提前4‐6天，堆肥周期縮短11‐14天，堆料含水率下降18%‐25%，堆體中總含氮量提高15%‐20%，提高了堆肥效果。
權(quán)利要求書
1.一種污泥好氧堆肥復(fù)合菌劑的制備方法，其特征在于：該方法將枯草芽孢桿菌 Bacillus subtilis，CICC保藏，編號10066、地衣芽孢桿菌Bacillus licheniformis，CICC保 藏，編號10103、嗜酸乳桿菌Lactobacillus acidophilus，CICC保藏，編號6075、產(chǎn)朊假絲 酵母Candida utilis，CICC保藏，編號31272、黃孢原毛平革菌Phanerochaete chrsosporium， CICC保藏，編號40719，經(jīng)過單獨培養(yǎng)后按比例混合接種至發(fā)酵培養(yǎng)基中進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng)得 到復(fù)合菌劑。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述污泥好氧堆肥復(fù)合菌劑的制備方法，其特征在于：配制復(fù)合菌 劑時，將枯草芽孢桿菌、地衣芽孢桿菌、嗜酸乳桿菌、產(chǎn)朊假絲酵母、黃孢原毛平革菌按 順序以菌液體積比為0.2‐1：0.2‐1：0.1‐1：0.2‐1：0.1‐1.2混合后，接種至高溫滅菌后的發(fā)酵 培養(yǎng)基中，混合菌液用量為發(fā)酵培養(yǎng)基重量的4%‐12%，靜置培養(yǎng)8‐12d，培養(yǎng)溫度為30‐35 ℃，當(dāng)總活體微生物菌數(shù)達(dá)到1×109cuf/ml以上時，完成復(fù)合菌劑的制備。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述污泥好氧堆肥復(fù)合菌劑的制備方法，其特征在于：所述枯草芽 孢桿菌、地衣芽孢桿菌、嗜酸乳桿菌、產(chǎn)朊假絲酵母、黃孢原毛平革菌按順序優(yōu)選菌液體 積比為0.8：0.5：0.5：0.6：0.2。
4.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述污泥好氧堆肥復(fù)合菌劑的制備方法，其特征在于，所述發(fā) 酵培養(yǎng)基是由以下重量配比的原料混合制成：紅糖15g‐25g、蛋白胨0.5g‐2g、豆餅粉1g‐3g、 磷酸二氫鉀0.1g‐0.5g、氯化鈣0.1g‐0.5g、硫酸銨0.5g‐1.5g、硫酸鎂0.1g‐0.3g、硫酸亞鐵 0.01g‐0.02g、乙酸鈉0.3g‐1g、碳酸氫鈉0.5g‐1.5g、蒸餾水1000ml，其pH值為7.0，發(fā)酵培 養(yǎng)基經(jīng)121℃高溫滅菌30min后冷卻才使用。
5.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述污泥好氧堆肥復(fù)合菌劑的制備方法，其特征在于，所述枯 草芽孢桿菌菌液的制備是：
挑取枯草芽孢桿菌菌種接種到固體斜面培養(yǎng)基，置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度為35‐40 ℃，培養(yǎng)時間為18‐24h，然后將長出的斜面菌落接種到液體培養(yǎng)基中進(jìn)行搖床振蕩培養(yǎng)， 搖床轉(zhuǎn)速為160r/min，培養(yǎng)溫度為35‐40℃，培養(yǎng)時間為24‐48小時，當(dāng)菌落數(shù)達(dá)到1× 109cuf/ml時，菌液制備完成;所述枯草芽孢桿菌固體斜面培養(yǎng)基是由以下重量配比的原料 混合制成：葡萄糖5g、牛肉膏1g、蛋白胨10g、氯化鈉5g、瓊脂15g、蒸餾水1000ml，pH 值7.0;所述液體培養(yǎng)基是由以下重量配比的原料混合制成：葡萄糖5g、牛肉膏1g、蛋白 胨10g、氯化鈉5g、蒸餾水1000ml，pH值7.0;固體斜面培養(yǎng)基和液體培養(yǎng)基均經(jīng)過121 ℃高溫滅菌30min后冷卻使用。
6.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述污泥好氧堆肥復(fù)合菌劑的制備方法，其特征在于，所述地 衣芽孢桿菌菌液的制備是：
挑取地衣芽孢桿菌菌種接種到固體斜面培養(yǎng)基，置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度為25‐30 ℃，培養(yǎng)時間為18‐24h，然后將長出的斜面菌落接種到液體培養(yǎng)基中進(jìn)行搖床振蕩培養(yǎng)， 搖床轉(zhuǎn)速為160r/min，培養(yǎng)溫度為25‐30℃，培養(yǎng)時間為24‐48小時，當(dāng)菌落數(shù)達(dá)到1× 109cuf/ml時，菌液制備完成;所述固體斜面培養(yǎng)基是由以下重量配比的原料混合制成：葡 萄糖5g、牛肉膏1g、蛋白胨10g、氯化鈉5g、瓊脂15g、蒸餾水1000ml，pH值7.0;所述 液體培養(yǎng)基是由以下重量配比的原料混合制成：葡萄糖5g、牛肉膏1g、蛋白胨10g、氯化 鈉5g、蒸餾水1000ml，其pH值7.0;固體斜面培養(yǎng)基和液體培養(yǎng)基均經(jīng)過121℃高溫滅菌 30min后冷卻使用。
7.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述污泥好氧堆肥復(fù)合菌劑的制備方法，其特征在于，所述嗜 酸乳桿菌菌液的制備是：
挑取嗜酸乳桿菌菌種接種到固體斜面培養(yǎng)基，置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度為35‐40 ℃，培養(yǎng)時間為24‐36h，然后將長出的斜面菌落接種到液體培養(yǎng)基中進(jìn)行搖床振蕩培養(yǎng)， 搖床轉(zhuǎn)速為160r/min，培養(yǎng)溫度為35‐40℃，培養(yǎng)時間為48‐72小時，當(dāng)菌落數(shù)達(dá)到1× 109cuf/ml時，菌液制備完成;所述嗜酸乳桿菌固體斜面培養(yǎng)基是由以下重量配比的原料混 合制成：葡萄糖10g、乳糖5g、牛肉膏5g、酵母提取物10g、蛋白胨10g、檸檬酸氫二銨 2g、Tween801.0g、乙酸鈉5g、磷酸氫二鉀2g、硫酸鎂0.1g、硫酸錳0.05g、碳酸鈣10g、 瓊脂15g、蒸餾水1000ml，pH值5.8‐6.8;所述液體培養(yǎng)基是由以下重量配比的原料混合制 成：葡萄糖10g、乳糖5g、牛肉膏5g、酵母提取物10g、蛋白胨10g、檸檬酸氫二銨2g、 Tween801.0g、乙酸鈉5g、磷酸氫二鉀2g、硫酸鎂0.1g、硫酸錳0.05g、碳酸鈣10g、蒸餾 水1000ml，其pH值5.8‐6.8;固體斜面培養(yǎng)基和液體培養(yǎng)基均經(jīng)過121℃高溫滅菌30min 后冷卻才使用。
8.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述污泥好氧堆肥復(fù)合菌劑的制備方法，其特征在于，所述產(chǎn) 朊假絲酵母菌液的制備是：
挑取產(chǎn)朊假絲酵母菌種接種到固體斜面培養(yǎng)基，置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度為25‐30 ℃，培養(yǎng)時間為16‐24h，然后將長出的斜面菌落接種到液體培養(yǎng)基中進(jìn)行搖床振蕩培養(yǎng)， 搖床轉(zhuǎn)速為160r/min，培養(yǎng)溫度為25‐30℃，培養(yǎng)時間為24‐48小時，當(dāng)菌落數(shù)達(dá)到1× 109cuf/ml時，菌液制備完成;所述產(chǎn)朊假絲酵母固體斜面培養(yǎng)基是由以下重量配比的原料 混合制成：12brxi.麥芽汁1000ml、酵母提取物5g、尿素0.2g、磷酸氫二鉀2g、氯化鈣0.02g、 瓊脂15g，其pH值為自然;所述液體培養(yǎng)基是由以下重量配比的原料混合制成：12brxi.麥 芽汁1000ml、酵母提取物5g、尿素0.2g、磷酸氫二鉀2g、氯化鈣0.02g，其pH值為自然; 固體斜面培養(yǎng)基和液體培養(yǎng)基均經(jīng)過121℃高溫滅菌30min后冷卻使用。
9.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述污泥好氧堆肥復(fù)合菌劑的制備方法，其特征在于，所述黃 孢原毛平革菌菌液的制備是：
挑取黃孢原毛平革菌菌種接種到固體斜面培養(yǎng)基，置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度為 28‐32℃，培養(yǎng)時間為48‐56h，然后將長出的斜面菌絲接種到液體培養(yǎng)基中進(jìn)行搖床振蕩培 養(yǎng)，搖床轉(zhuǎn)速為80r/min，培養(yǎng)溫度為28‐32℃，培養(yǎng)時間為48‐72h，當(dāng)菌落數(shù)達(dá)到1× 109cuf/ml時，菌液制備完成;所述黃孢原毛平革菌固體斜面培養(yǎng)基是由以下重量配比的原 料混合制成：馬鈴薯煮汁1000ml、蔗糖15g、瓊脂20g，其pH值5.0‐6.0;所述液體培養(yǎng)基 是由以下重量配比的原料混合制成：馬鈴薯煮汁1000ml、蔗糖15g，其pH值5.0‐6.0;固 體斜面培養(yǎng)基和液體培養(yǎng)基均經(jīng)過121℃高溫滅菌30min后冷卻使用。
說明書
一種污泥好氧堆肥復(fù)合菌劑的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域
本發(fā)明涉及一種污泥好氧堆肥復(fù)合菌劑，特別涉及一種污泥好氧堆肥復(fù)合菌劑的制備 方法。
背景技術(shù)
隨著我國城鎮(zhèn)化進(jìn)程的加快，城市污水處理量不斷提高，污水處理技術(shù)已日漸成熟， 伴隨而來的問題是如何處理處置污水處理廠處理污水時所產(chǎn)生的大量剩余污泥。目前我國 剩余污泥的處理處置方法主要有干化焚燒、衛(wèi)生填埋、堆肥等。其中污泥堆肥技術(shù)通常是 與城市垃圾、畜禽糞便、秸稈、木屑、粉煤灰等輔料混合后進(jìn)行好氧堆肥，是一種積極有 效的污泥資源化和無害化處理處置方式。傳統(tǒng)的污泥堆肥法均是單純利用堆料中土著的微 生物進(jìn)行自然發(fā)酵來完成，由于堆肥初期土著微生物量少，繁殖較慢，往往容易造成堆肥 發(fā)酵周期長、產(chǎn)生臭味、肥效低等問題。因此，研究者們開始使用向污泥堆肥接種微生物 功能菌劑來縮短發(fā)酵周期、促進(jìn)堆肥快速腐熟和提高堆肥產(chǎn)品質(zhì)量。
如中國專利申請?zhí)枮?01010514582.7的說明書中公開了“利用堆肥復(fù)合菌劑進(jìn)行污泥 好氧堆肥的方法”，其中復(fù)合菌劑包含同復(fù)合菌劑A和復(fù)合菌劑B，在堆肥初期接種復(fù)合菌 劑A能促進(jìn)堆料中蛋白質(zhì)、脂肪、淀粉等快速分解，使堆肥溫度提前達(dá)到發(fā)酵高溫期，在 高溫期以覆蓋的形式在堆體表面接種一層厚度為0.1m的復(fù)合菌種B降解纖維素和半纖維素 來達(dá)到堆肥效果，但是這種采用不同時期用不同的方式進(jìn)行接種，需要把握好接種時機(jī)， 而且操作要求嚴(yán)格精細(xì)。
中國專利申請?zhí)枮?00910113229.5的說明書公開了“一種堆肥發(fā)酵復(fù)合菌劑的制備方 法”，其利用了產(chǎn)朊假絲酵母、植物乳酸菌、枯草芽孢桿菌三種菌種組成的復(fù)合菌種，接種 堆肥后能夠強(qiáng)化堆肥中纖維素的降解，使降解質(zhì)量提升，但是堆肥需經(jīng)常翻堆，容易遭成 堆體臭氣散發(fā)，氮元素?fù)p失嚴(yán)重，有機(jī)物喪失，且堆肥周期長達(dá)6周，肥效效果不盡理想 等。因此，污泥好氧堆肥復(fù)合菌劑的研究開發(fā)還需要進(jìn)行不斷的探索，以使污泥好氧堆肥 中木質(zhì)纖維素快速降解，促使堆肥快速腐熟，縮短發(fā)酵周期，減少氮元素的損失從而達(dá)到 更好的堆肥處理效果。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種污泥好氧堆肥復(fù)合菌劑的制備方法，將該方法得到復(fù)合菌 劑應(yīng)用于污泥好氧堆肥，可使污泥好氧堆肥中木質(zhì)纖維素快速降解，促使堆肥快速腐熟， 縮短發(fā)酵周期，減少氮元素的損失從而達(dá)到更好的堆肥處理效果。
本發(fā)明以如下技術(shù)方案解決上述技術(shù)問題：
本發(fā)明污泥好氧堆肥復(fù)合菌劑的制備方法，采用中國工業(yè)微生物菌種保藏管理中心 (CICC)保藏的枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis，編號10066)、地衣芽孢桿菌(Bacillus licheniformis，編號10103)、嗜酸乳桿菌(Lactobacillus acidophilus，編號6075)、產(chǎn)朊假絲 酵母(Candida utilis，編號31272)、黃孢原毛平革菌(Phanerochaete chrsosporium，編號 40719)，經(jīng)過單獨培養(yǎng)后按比例混合接種至發(fā)酵培養(yǎng)基中進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng)
本發(fā)明污泥好氧堆肥復(fù)合菌劑的制備方法，在配制復(fù)合菌劑時，將枯草芽孢桿菌、地 衣芽孢桿菌、嗜酸乳桿菌、產(chǎn)朊假絲酵母、黃孢原毛平革菌按順序以菌液體積比為0.2‐1： 0.2‐1：0.1‐1：0.2‐1：0.1‐1.2混合后，接種至高溫滅菌后的發(fā)酵培養(yǎng)基中，混合菌液用量為 發(fā)酵培養(yǎng)基重量的4%‐12%，靜置培養(yǎng)8‐12d，培養(yǎng)溫度為30‐35℃，當(dāng)總活體微生物菌數(shù)達(dá) 到1×109cuf/ml以上時，完成復(fù)合菌劑的制備。
本發(fā)明污泥好氧堆肥復(fù)合菌劑的制備方法，所述枯草芽孢桿菌、地衣芽孢桿菌、嗜酸 乳桿菌、產(chǎn)朊假絲酵母、黃孢原毛平革菌按順序優(yōu)選菌液體積比為0.8：0.5：0.5：0.6：0.2。
本發(fā)明污泥好氧堆肥復(fù)合菌劑的制備方法，所述發(fā)酵培養(yǎng)基是由以下重量配比的原料 混合制成：紅糖15g‐25g、蛋白胨0.5g‐2g、豆餅粉1g‐3g、磷酸二氫鉀0.1g‐0.5g、氯化鈣 0.1g‐0.5g、硫酸銨0.5g‐1.5g、硫酸鎂0.1g‐0.3g、硫酸亞鐵0.01g‐0.02g、乙酸鈉0.3g‐1g、碳 酸氫鈉0.5g‐1.5g、蒸餾水1000ml，其pH值為7.0，發(fā)酵培養(yǎng)基經(jīng)121℃高溫滅菌30min后 冷卻才使用。
本發(fā)明污泥好氧堆肥復(fù)合菌劑的制備方法，所述枯草芽孢桿菌菌液的制備是：
挑取枯草芽孢桿菌菌種接種到固體斜面培養(yǎng)基，置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度為35‐40 ℃，培養(yǎng)時間為18‐24h，然后將長出的斜面菌落接種到液體培養(yǎng)基中進(jìn)行搖床振蕩培養(yǎng)， 搖床轉(zhuǎn)速為160r/min，培養(yǎng)溫度為35‐40℃，培養(yǎng)時間為24‐48小時，當(dāng)菌落數(shù)達(dá)到1× 109cuf/ml時，菌液制備完成;所述枯草芽孢桿菌固體斜面培養(yǎng)基是由以下重量配比的原料 混合制成：葡萄糖5g、牛肉膏1g、蛋白胨10g、氯化鈉5g、瓊脂15g、蒸餾水1000ml，pH 值7.0;所述液體培養(yǎng)基是由以下重量配比的原料混合制成：葡萄糖5g、牛肉膏1g、蛋白 胨10g、氯化鈉5g、蒸餾水1000ml，pH值7.0;固體斜面培養(yǎng)基和液體培養(yǎng)基均經(jīng)過121 ℃高溫滅菌30min后冷卻使用。
本發(fā)明污泥好氧堆肥復(fù)合菌劑的制備方法，所述地衣芽孢桿菌菌液的制備是：
挑取地衣芽孢桿菌菌種接種到固體斜面培養(yǎng)基，置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度為25‐30 ℃，培養(yǎng)時間為18‐24h，然后將長出的斜面菌落接種到液體培養(yǎng)基中進(jìn)行搖床振蕩培養(yǎng)， 搖床轉(zhuǎn)速為160r/min，培養(yǎng)溫度為25‐30℃，培養(yǎng)時間為24‐48小時，當(dāng)菌落數(shù)達(dá)到1× 109cuf/ml時，菌液制備完成;所述固體斜面培養(yǎng)基是由以下重量配比的原料混合制成：葡 萄糖5g、牛肉膏1g、蛋白胨10g、氯化鈉5g、瓊脂15g、蒸餾水1000ml，pH值7.0;所述 液體培養(yǎng)基是由以下重量配比的原料混合制成：葡萄糖5g、牛肉膏1g、蛋白胨10g、氯化 鈉5g、蒸餾水1000ml，其pH值7.0;固體斜面培養(yǎng)基和液體培養(yǎng)基均經(jīng)過121℃高溫滅菌 30min后冷卻使用。
本發(fā)明污泥好氧堆肥復(fù)合菌劑的制備方法，所述嗜酸乳桿菌菌液的制備是：
挑取嗜酸乳桿菌菌種接種到固體斜面培養(yǎng)基，置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度為35‐40 ℃，培養(yǎng)時間為24‐36h，然后將長出的斜面菌落接種到液體培養(yǎng)基中進(jìn)行搖床振蕩培養(yǎng)， 搖床轉(zhuǎn)速為160r/min，培養(yǎng)溫度為35‐40℃，培養(yǎng)時間為48‐72小時，當(dāng)菌落數(shù)達(dá)到1× 109cuf/ml時，菌液制備完成;所述嗜酸乳桿菌固體斜面培養(yǎng)基是由以下重量配比的原料混 合制成：葡萄糖10g、乳糖5g、牛肉膏5g、酵母提取物10g、蛋白胨10g、檸檬酸氫二銨 2g、Tween801.0g、乙酸鈉5g、磷酸氫二鉀2g、硫酸鎂0.1g、硫酸錳0.05g、碳酸鈣10g、 瓊脂15g、蒸餾水1000ml，pH值5.8‐6.8;所述液體培養(yǎng)基是由以下重量配比的原料混合制 成：葡萄糖10g、乳糖5g、牛肉膏5g、酵母提取物10g、蛋白胨10g、檸檬酸氫二銨2g、 Tween801.0g、乙酸鈉5g、磷酸氫二鉀2g、硫酸鎂0.1g、硫酸錳0.05g、碳酸鈣10g、蒸 餾水1000ml，其pH值5.8‐6.8;固體斜面培養(yǎng)基和液體培養(yǎng)基均經(jīng)過121℃高溫滅菌30min 后冷卻才使用。
本發(fā)明污泥好氧堆肥復(fù)合菌劑的制備方法，所述產(chǎn)朊假絲酵母菌液的制備是：
挑取產(chǎn)朊假絲酵母菌種接種到固體斜面培養(yǎng)基，置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度為25‐30 ℃，培養(yǎng)時間為16‐24h，然后將長出的斜面菌落接種到液體培養(yǎng)基中進(jìn)行搖床振蕩培養(yǎng)， 搖床轉(zhuǎn)速為160r/min，培養(yǎng)溫度為25‐30℃，培養(yǎng)時間為24‐48小時，當(dāng)菌落數(shù)達(dá)到1× 109cuf/ml時，菌液制備完成;所述產(chǎn)朊假絲酵母固體斜面培養(yǎng)基是由以下重量配比的原料 混合制成：12brxi.麥芽汁1000ml、酵母提取物5g、尿素0.2g、磷酸氫二鉀2g、氯化鈣0.02g、 瓊脂15g，其pH值為自然;所述液體培養(yǎng)基是由以下重量配比的原料混合制成：12brxi.麥 芽汁1000ml、酵母提取物5g、尿素0.2g、磷酸氫二鉀2g、氯化鈣0.02g，其pH值為自然; 固體斜面培養(yǎng)基和液體培養(yǎng)基均經(jīng)過121℃高溫滅菌30min后冷卻使用。
本發(fā)明污泥好氧堆肥復(fù)合菌劑的制備方法，所述黃孢原毛平革菌菌液的制備是：
挑取黃孢原毛平革菌菌種接種到固體斜面培養(yǎng)基，置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度為 28‐32℃，培養(yǎng)時間為48‐56h，然后將長出的斜面菌絲接種到液體培養(yǎng)基中進(jìn)行搖床振蕩培 養(yǎng)，搖床轉(zhuǎn)速為80r/min，培養(yǎng)溫度為28‐32℃，培養(yǎng)時間為48‐72h，當(dāng)菌落數(shù)達(dá)到1× 109cuf/ml時，菌液制備完成;所述黃孢原毛平革菌固體斜面培養(yǎng)基是由以下重量配比的原 料混合制成：馬鈴薯煮汁1000ml、蔗糖15g、瓊脂20g，其pH值5.0‐6.0;所述液體培養(yǎng)基 是由以下重量配比的原料混合制成：馬鈴薯煮汁1000ml、蔗糖15g，其pH值5.0‐6.0;固 體斜面培養(yǎng)基和液體培養(yǎng)基均經(jīng)過121℃高溫滅菌30min后冷卻使用。
上述涉及的酵母提取物是指標(biāo)準(zhǔn)的提取物。
本發(fā)明所用的枯草芽孢桿菌和地衣芽孢桿菌能促進(jìn)堆肥中纖維素快速降解，同時地衣 芽孢桿菌能促進(jìn)復(fù)合菌劑中嗜酸乳桿菌的生長繁殖;嗜酸乳桿菌能產(chǎn)生小分子有機(jī)酸中和 堆體中的氨氣等堿性物質(zhì)，減少堆體臭味;黃孢原毛平革菌產(chǎn)生木質(zhì)素過氧化物酶、錳過 氧化物酶從而能加快木質(zhì)素結(jié)構(gòu)分解。因此，在污泥好氧堆肥初期接種該復(fù)合菌劑，可使 污泥好氧堆肥中木質(zhì)纖維素快速降解，促使堆肥快速腐熟，縮短發(fā)酵周期，減少氮元素的 損失從而達(dá)到更好的堆肥處理效果。
本發(fā)明方法制備的復(fù)合菌劑不僅限用于污泥好氧堆肥，還可用于餐廚垃圾、畜禽糞便、 農(nóng)業(yè)廢棄物等堆肥。
具體實施方式
本發(fā)明方法使用中國工業(yè)微生物菌種保藏管理中心(CICC)保藏的枯草芽孢桿菌 (Bacillus subtilis，編號10066)、地衣芽孢桿菌(Bacillus licheniformis，編號10103)、嗜 酸乳桿菌(Lactobacillus acidophilus，編號6075)、產(chǎn)朊假絲酵母(Candida utilis，編號31272)、 黃孢原毛平革菌(Phanerochaete chrsosporium，編號40719)，經(jīng)過單獨培養(yǎng)后按比例混合 接種至發(fā)酵培養(yǎng)基中進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng)得到復(fù)合菌劑。
所述復(fù)合菌劑中各菌種的制備方法如下：
(1)枯草芽孢桿菌菌液的制備
挑取枯草芽孢桿菌菌種接種到固體斜面培養(yǎng)基，置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度為35‐40 ℃，培養(yǎng)時間為18‐24h。然后將長出的斜面菌落接種到液體培養(yǎng)基中進(jìn)行搖床振蕩培養(yǎng)， 搖床轉(zhuǎn)速為160r/min，培養(yǎng)溫度為35‐40℃，培養(yǎng)時間為24‐48小時，當(dāng)菌落數(shù)達(dá)到1× 109cuf/ml時，菌液制備完成。所述枯草芽孢桿菌固體斜面培養(yǎng)基是由以下重量配比的原料 混合制成：葡萄糖5g、牛肉膏1g、蛋白胨10g、氯化鈉5g、瓊脂15g、蒸餾水1000ml，pH 值7.0;所述液體培養(yǎng)基為固體斜面培養(yǎng)基配方去瓊脂。固體斜面培養(yǎng)基和液體培養(yǎng)基均經(jīng) 過121℃高溫滅菌30min后冷卻使用。
(2)地衣芽孢桿菌菌液的制備
挑取地衣芽孢桿菌菌種接種到固體斜面培養(yǎng)基，置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度為25‐30 ℃，培養(yǎng)時間為18‐24h。然后將長出的斜面菌落接種到液體培養(yǎng)基中進(jìn)行搖床振蕩培養(yǎng)， 搖床轉(zhuǎn)速為160r/min，培養(yǎng)溫度為25‐30℃，培養(yǎng)時間為24‐48小時，當(dāng)菌落數(shù)達(dá)到1× 109cuf/ml時，菌液制備完成。所述地衣芽孢桿菌固體斜面培養(yǎng)基由以下重量配比的原料混 合制成：葡萄糖5g、牛肉膏1g、蛋白胨10g、氯化鈉5g、瓊脂15g、蒸餾水1000ml，pH 值7.0;所述液體培養(yǎng)基為固體斜面培養(yǎng)基配方去瓊脂。固體斜面培養(yǎng)基和液體培養(yǎng)基均經(jīng) 過121℃高溫滅菌30min后冷卻使用。
(3)嗜酸乳桿菌菌液的制備
挑取嗜酸乳桿菌菌種接種到固體斜面培養(yǎng)基，置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度為35‐40 ℃，培養(yǎng)時間為24‐36h。然后將長出的斜面菌落接種到液體培養(yǎng)基中進(jìn)行搖床振蕩培養(yǎng)， 搖床轉(zhuǎn)速為160r/min，培養(yǎng)溫度為35‐40℃，培養(yǎng)時間為48‐72小時，當(dāng)菌落數(shù)達(dá)到1× 109cuf/ml時，菌液制備完成。所述嗜酸乳桿菌固體斜面培養(yǎng)基由以下重量配比的原料混合 制成：葡萄糖10g、乳糖5g、牛肉膏5g、酵母提取物10g、蛋白胨10g、檸檬酸氫二銨2g、 Tween801.0g、乙酸鈉5g、磷酸氫二鉀2g、硫酸鎂0.1g、硫酸錳0.05g、碳酸鈣10g、瓊脂 15g、蒸餾水1000ml，pH值5.8‐6.8;所述液體培養(yǎng)基為固體斜面培養(yǎng)基配方去瓊脂。固體 斜面培養(yǎng)基和液體培養(yǎng)基均經(jīng)過121℃高溫滅菌30min后冷卻才使用。
(4)產(chǎn)朊假絲酵母菌液的制備
挑取產(chǎn)朊假絲酵母菌種接種到固體斜面培養(yǎng)基，置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度為25‐30 ℃，培養(yǎng)時間為16‐24h。然后將長出的斜面菌落接種到液體培養(yǎng)基中進(jìn)行搖床振蕩培養(yǎng)， 搖床轉(zhuǎn)速為160r/min，培養(yǎng)溫度為25‐30℃，培養(yǎng)時間為24‐48小時，當(dāng)菌落數(shù)達(dá)到1× 109cuf/ml時，菌液制備完成。所述產(chǎn)朊假絲酵母固體斜面培養(yǎng)基由以下重量配比的原料混 合制成：12brxi.麥芽汁1000ml、酵母提取物5g、尿素0.2g、磷酸氫二鉀2g、氯化鈣0.02g、 瓊脂15g，pH值為自然;所述液體培養(yǎng)基為固體斜面培養(yǎng)基配方去瓊脂。固體斜面培養(yǎng)基 和液體培養(yǎng)基均經(jīng)過121℃高溫滅菌30min后冷卻使用。
(5)黃孢原毛平革菌菌液的制備
挑取黃孢原毛平革菌菌種接種到固體斜面培養(yǎng)基，置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度為 28‐32℃，培養(yǎng)時間為48‐56h。然后將長出的斜面菌種接種到液體培養(yǎng)基中進(jìn)行搖床振蕩培 養(yǎng)，搖床轉(zhuǎn)速為80r/min，培養(yǎng)溫度為28‐32℃，培養(yǎng)時間為48‐72h，當(dāng)菌落數(shù)達(dá)到1× 109cuf/ml時，菌液制備完成。所述黃孢原毛平革菌固體斜面培養(yǎng)基由以下重量配比的原料 混合制成：馬鈴薯煮汁1000ml、蔗糖15g、瓊脂20g，pH值5.0‐6.0;所述液體培養(yǎng)基為固 體斜面培養(yǎng)基配方去瓊脂。固體斜面培養(yǎng)基和液體培養(yǎng)基均經(jīng)過121℃高溫滅菌30min后 冷卻使用。
以下是本發(fā)明產(chǎn)品復(fù)合菌劑的制備實例：
實施例1:
將枯草芽孢桿菌、地衣芽孢桿菌、嗜酸乳桿菌、產(chǎn)朊假絲酵母、黃孢原毛平革菌的菌 液按體積比為0.2：0.2：0.1：0.2：0.1混合后，接種至發(fā)酵培養(yǎng)基中，混合菌液用量為發(fā) 酵培養(yǎng)基重量的12%，在30℃靜置培養(yǎng)12d，當(dāng)發(fā)酵培養(yǎng)基中長滿菌絲時，搖勻顯微計數(shù) 總微生物活體數(shù)能達(dá)到1×109cuf/ml，培養(yǎng)完成。所述發(fā)酵培養(yǎng)基配方為：紅糖15g、蛋白 胨1g、豆餅粉3g、磷酸二氫鉀0.1g、氯化鈣0.1g、硫酸銨0.5g、硫酸鎂0.1g、硫酸亞鐵0.01g、 乙酸鈉0.3g、碳酸氫鈉0.5g、蒸餾水1000ml，發(fā)酵培養(yǎng)基pH值7.0。發(fā)酵培養(yǎng)基經(jīng)121℃ 高溫滅菌30min后冷卻才使用。
實施例2:
將枯草芽孢桿菌、地衣芽孢桿菌、嗜酸乳桿菌、產(chǎn)朊假絲酵母、黃孢原毛平革菌的菌 液按體積比0.4：0.3：0.1：0.4：0.4混合后，接種至發(fā)酵培養(yǎng)基中，混合菌液用量為發(fā)酵 培養(yǎng)基重量的10%，在35℃靜置培養(yǎng)10d，當(dāng)發(fā)酵培養(yǎng)基中長滿菌絲時，搖勻顯微計數(shù)總 微生物活體數(shù)能達(dá)到1×109cuf/ml，培養(yǎng)完成。所述發(fā)酵培養(yǎng)基的配方為：紅糖20g、蛋白 胨1.5g、豆餅粉2g、磷酸二氫鉀0.2g、氯化鈣0.2g、硫酸銨0.5g、硫酸鎂0.2g、硫酸亞鐵 0.02g、乙酸鈉0.5g、碳酸氫鈉1g、蒸餾水1000ml，發(fā)酵培養(yǎng)基pH值7.0。發(fā)酵培養(yǎng)基經(jīng) 121℃高溫滅菌30min后冷卻才使用。
實施例3：
將枯草芽孢桿菌、地衣芽孢桿菌、嗜酸乳桿菌、產(chǎn)朊假絲酵母、黃孢原毛平革菌的菌 液按體積比0.8：0.5：0.5：0.6：0.2混合后，接種至發(fā)酵培養(yǎng)基中，混合菌液用量為發(fā)酵 培養(yǎng)基重量的8%，在30℃靜置培養(yǎng)10d，當(dāng)發(fā)酵培養(yǎng)基中長滿菌絲時，搖勻顯微計數(shù)總微 生物活體數(shù)能達(dá)到1×109cuf/ml，培養(yǎng)完成。所述發(fā)酵培養(yǎng)基的配方為：紅糖20g、蛋白胨 1.5g、豆餅粉2g、磷酸二氫鉀0.5g、氯化鈣0.1g、硫酸銨1.5g、硫酸鎂0.1g、硫酸亞鐵0.01g、 乙酸鈉0.3g、碳酸氫鈉0.5g、蒸餾水1000ml，發(fā)酵培養(yǎng)基pH值7.0。發(fā)酵培養(yǎng)基經(jīng)121℃ 高溫滅菌30min后冷卻才使用。
此實施例為最優(yōu)實施例。
實施例4：
將枯草芽孢桿菌、地衣芽孢桿菌、嗜酸乳桿菌、產(chǎn)朊假絲酵母、黃孢原毛平革菌的菌 液按體積比0.6：1：1：0.8：1.2混合后，接種至發(fā)酵培養(yǎng)基中，混合菌液用量為發(fā)酵培養(yǎng) 基重量的8%，在30℃靜置培養(yǎng)8d，當(dāng)發(fā)酵培養(yǎng)基中長滿菌絲時，搖勻顯微計數(shù)總微生物 活體數(shù)能達(dá)到1×109cuf/ml，培養(yǎng)完成。所述發(fā)酵培養(yǎng)基的配方為：紅糖20g、蛋白胨1.5、 豆餅粉3g、磷酸二氫鉀0.3g、氯化鈣0.3g、硫酸銨1.5g、硫酸鎂0.2g、硫酸亞鐵0.02g、乙 酸鈉0.3g、碳酸氫鈉0.5g、蒸餾水1000ml，發(fā)酵培養(yǎng)基pH值7.0。發(fā)酵培養(yǎng)基經(jīng)121℃高 溫滅菌30min后冷卻才使用。
實施例5：
將枯草芽孢桿菌、地衣芽孢桿菌、嗜酸乳桿菌、產(chǎn)朊假絲酵母、黃孢原毛平革菌的菌 液按體積比1：0.8：1：1：1.2混合后，接種至發(fā)酵培養(yǎng)基中，混合菌液用量為發(fā)酵培養(yǎng)基 重量的12%，在30℃靜置培養(yǎng)10d，當(dāng)發(fā)酵培養(yǎng)基中長滿菌絲時，搖勻顯微計數(shù)總微生物 活體數(shù)能達(dá)到1×109cuf/ml，培養(yǎng)完成。所述發(fā)酵培養(yǎng)基的配方為：紅糖25g、蛋白胨2g、 豆餅粉3g、磷酸二氫鉀0.5g、氯化鈣0.3g、硫酸銨1.5g、硫酸鎂0.3g、硫酸亞鐵0.02g、乙 酸鈉1g、碳酸氫鈉1.5g、蒸餾水1000ml，發(fā)酵培養(yǎng)基pH值7.0。發(fā)酵培養(yǎng)基經(jīng)121℃高溫 滅菌30min后冷卻才使用。
上述實例產(chǎn)品復(fù)合菌劑在污泥好氧堆肥中的使用情況：
按上述實施例1‐5制備得到的復(fù)合菌劑，使用時以直接噴灑的方式按1：100‐200接入 污泥堆肥中，當(dāng)堆體經(jīng)過發(fā)酵升溫后降溫，最后溫度與環(huán)境溫度相同時，完成污泥好氧堆 肥。污泥堆肥前與輔料混拌均勻，調(diào)節(jié)污泥含水率為50%‐60%，堆肥的長寬高度比為 2m:1m:1m。所述輔料為城市垃圾、畜禽糞便、秸稈、木屑、粉煤灰中的兩種或兩種以上混 合物。經(jīng)過與未接種復(fù)合菌劑的污泥好氧堆肥對比，堆體到達(dá)高溫期的時間提前了4‐6天， 堆肥周期縮短了11‐14天，堆料含水率下降了18%‐25%，堆體臭氣排放減少，堆料中總含 氮量提高了15%‐20%，污泥好氧堆肥得到了較好的效果。
