申請(qǐng)日2015.09.08
公開(公告)日2015.11.18
IPC分類號(hào)C12N1/36; C12N1/20; C12R1/01; C12R1/06; C12R1/07; C12R1/38
摘要
一種煤制油廢水COD降解用菌種馴化試劑盒及馴化方法，試劑盒包括富集管、馴化預(yù)制管A、馴化預(yù)制管B;馴化方法包括缺氧馴化和好氧馴化。該試劑盒是通過本實(shí)驗(yàn)室在全國大量采集煤制油廢水樣品，對(duì)廢水成分進(jìn)行分析，并通過實(shí)驗(yàn)配制出了一種可以模擬真實(shí)污水的馴化培養(yǎng)基，并以此為基礎(chǔ)形成了試劑盒。該馴化培養(yǎng)基具有較強(qiáng)的適應(yīng)性，經(jīng)本試劑盒馴化后的菌種投放到多個(gè)煤制油廢水中，COD降解能力均有所提高，大大縮短污水處理啟動(dòng)時(shí)間，該試劑盒可模擬缺氧、好氧生物法工藝，可應(yīng)用于煤制油污水處理菌劑的產(chǎn)品優(yōu)化，以及污水廠在運(yùn)行前對(duì)污泥進(jìn)行快速馴化。
摘要附圖
權(quán)利要求書
1.一種煤制油廢水COD降解用菌種馴化試劑盒，其特征在于：它是由富集 管、馴化預(yù)制管A、馴化預(yù)制管B組成;其中：
(一)、富集管：
富集管的制備：
(1)、取牛肉膏0.7-1.0g，蛋白胨0.7-1.0g，磷酸二氫鉀1.2-2.0g，磷 酸氫二鈉1.5-2.5g，用1L水溶解，以上培養(yǎng)基用濃度5%的碳酸鈉和5%HCl調(diào) pH至7.00-7.50，分裝到50ml螺口管中，每支管加入培養(yǎng)基20ml;分裝完畢 后，將螺口管蓋擰松，115℃滅菌25-30min，待滅菌結(jié)束并冷卻至室溫后，從滅 菌鍋中取出并擰緊管蓋，至此基礎(chǔ)富集管制備完成;
(2)、取苯酚10-13mg，萘酚2-4mg，喹啉1-2mg，甲醇0.08-0.12ml，丁醇 0.08-0.12ml，用100ml無菌水溶解，溶解后在無菌條件下用0.22μm無菌濾膜 過濾除菌;過濾除菌完成后，取2ml經(jīng)過過濾除菌的溶液，0.2-0.3μl煤制柴 油，在無菌條件下加入到步驟(1)中的基礎(chǔ)富集管中，在高速漩渦震蕩器上震 蕩5-10min，至此富集管制備完成;
(二)、馴化預(yù)制管A：
馴化預(yù)制管A的制備：
(1)、取牛肉膏0.4-0.7g，蛋白胨0.4-0.7g，丙三醇0.4-0.6ml，磷酸二 氫鉀1.2-2.0g，磷酸氫二鈉1.5-2.5g，用1L水溶解，以上培養(yǎng)基用濃度5%的 碳酸鈉和5%HCl調(diào)pH至7.50-8.00，分裝到50ml螺口管中，每支管加入培養(yǎng) 基30ml;分裝完畢后，將螺口管蓋擰松，115℃滅菌25-30min，待滅菌結(jié)束并 冷卻至室溫后，從滅菌鍋中取出并擰緊管蓋，至此基礎(chǔ)馴化預(yù)制管A制備完成;
(2)、取苯酚18-22mg，萘酚8-12mg，喹啉4-6mg，苯胺4-6mg，吡啶0.4-0.6mg， 辛基十二烷醇0.1-0.2mg，用100ml無菌水溶解，溶解后在無菌條件下用0.22 μm無菌濾膜過濾除菌，過濾除菌后的溶液為水添加物A;
(3)、取萘130-170mg，甲苯3-7mg，鄰苯二甲酸二丁酯2-3mg，苯并咪唑 2-3mg，甲醇0.08-0.12ml，丁醇0.08-0.12ml，用100ml75%乙醇溶解，此溶液 為醇添加物A;
(4)、分別取水添加物A3ml，醇添加物A0.012ml，煤制柴油1.0-1.2μl， 在無菌條件下裝到步驟(1)中的基礎(chǔ)馴化預(yù)制管A中，在高速漩渦震蕩器上震 蕩5-10min，至此馴化預(yù)制管A制備完成;
(三)、馴化預(yù)制管B：
馴化預(yù)制管B的制備：
(1)、取牛肉膏0.2-0.4g，蛋白胨0.2-0.4g，丙三醇0.6-0.8ml，磷酸二 氫鉀1.2-2.0g，磷酸氫二鈉1.5-2.5g，用1L水溶解，以上培養(yǎng)基用濃度5%的 碳酸鈉和5%HCl調(diào)pH至7.50-8.00，分裝到50ml螺口管中，每支管加入培養(yǎng) 基30ml;分裝完畢后，將螺口管蓋擰松，115℃滅菌25-30min，待滅菌結(jié)束并 冷卻至室溫后，從滅菌鍋中取出并擰緊管蓋，至此基礎(chǔ)馴化預(yù)制管B制備完成;
(2)、取苯酚150-170mg，萘酚18-22mg，喹啉9-12mg，苯胺10-12mg，吡 啶0.9-1.2mg，辛基十二烷醇0.4-0.6mg，用100ml無菌水溶解，溶解后在無菌 條件下用0.22μm無菌濾膜過濾除菌，過濾除菌后的溶液為水添加物B;
(3)、取萘540-560mg，甲苯18-22mg，鄰苯二甲酸二丁酯8-12mg，苯并咪 唑8-12mg，甲醇1.8-2.2ml，丁醇1.8-2.2ml，用100ml75%乙醇溶解，此溶液 為醇添加物B;
(4)、分別取水添加物B3ml，醇添加物B0.012ml，煤制柴油3.0-4.0μl， 在無菌條件下裝到步驟(1)中的基礎(chǔ)馴化預(yù)制管B中，在高速漩渦震蕩器上震 蕩5-10min，至此馴化預(yù)制管B制備完成。
2.一種采用權(quán)利要求1所述的煤制油廢水COD降解用菌種馴化試劑盒馴化 方法，其特征在于：包括以下步驟：
(一)、缺氧階段馴化：
步驟1、將待馴化樣品取1-3ml接種到第1富集管中，將第1富集管的管蓋 擰緊，平放入搖床28-35℃、150-200rpm震蕩培養(yǎng)24-48小時(shí);
步驟2、取經(jīng)第1富集管培養(yǎng)的樣品5ml，接種到第1馴化預(yù)制管A中，將 第1富集管連同管內(nèi)剩余樣品放入4℃冷藏;
步驟3、將第1馴化預(yù)制管A的管蓋擰緊，平放入搖床25-30℃、100-150rpm 震蕩培養(yǎng)24-48小時(shí);培養(yǎng)完成后靜置30-60min，取上清液A130ml放入100ml 經(jīng)過滅菌的第1三角瓶中，然后放入4℃留存;取沉淀5ml接種到第2馴化預(yù) 制管A中繼續(xù)培養(yǎng);
步驟4、將第2馴化預(yù)制管A的管蓋擰緊，平放入搖床25-30℃、100-150rpm 震蕩培養(yǎng)24-48小時(shí);培養(yǎng)完成后靜置30-60min，取上清液A230ml放入100ml 經(jīng)過滅菌的第2三角瓶中，然后放入4℃留存;取沉淀5ml接種到第3馴化預(yù) 制管A中繼續(xù)培養(yǎng);
步驟5、將第3馴化預(yù)制管A的管蓋擰緊，平放入搖床25-30℃、100-150rpm 震蕩培養(yǎng)24-48小時(shí);培養(yǎng)完成后靜置30-60min，取上清液A330ml放入100ml 經(jīng)過滅菌的第3三角瓶中，然后放入4℃留存;當(dāng)樣品經(jīng)過步驟4的第3馴化 預(yù)制管A培養(yǎng)后，取沉淀5ml，接種到第1馴化預(yù)制管B中;
步驟6、將步驟5的第1馴化預(yù)制管B的管蓋擰緊，平放入搖床25-28℃、 100-150rpm震蕩培養(yǎng)48-72h;培養(yǎng)完成后靜置30-60min，取上清液B130ml放 入100ml經(jīng)過滅菌的第4三角瓶中，然后放入4℃留存;取沉淀5ml接種到第2 馴化預(yù)制管B中繼續(xù)培養(yǎng);
步驟7、將步驟6的第2馴化預(yù)制管B的管蓋擰緊，平放入搖床25-28℃、 100-150rpm震蕩培養(yǎng)48-72h;培養(yǎng)完成后靜置30-60min，取上清液B230ml放 入100ml經(jīng)過滅菌的第5三角瓶中，然后放入4℃留存;取沉淀5ml接種到第3 馴化預(yù)制管B中繼續(xù)培養(yǎng);
步驟8、將步驟7的第3馴化預(yù)制管B的管蓋擰緊，平放入搖床25-28℃、 100-150rpm震蕩培養(yǎng)48-72h;培養(yǎng)完成后靜置30-60min，取上清液B330ml放 入100ml經(jīng)過滅菌的第6三角瓶中，然后放入4℃留存;當(dāng)樣品經(jīng)過步驟7的 第3馴化預(yù)制管B培養(yǎng)后，取沉淀1ml，接種到第2富集管中，將第2富集管的 管蓋擰緊，平放入搖床28-35℃、150-200rpm震蕩培養(yǎng)24-48小時(shí);培養(yǎng)后將第 2富集管冷藏或冷凍保存，此馴化后菌種為缺氧馴化菌種;
(二)、好氧階段馴化：
步驟9、當(dāng)樣品經(jīng)過步驟5的第3馴化預(yù)制管A培養(yǎng)完成后，將冷藏的第1 富集管取出并恢復(fù)室溫;待恢復(fù)室溫6-10h后，取5ml接種到上清液A3中;
步驟10、將步驟9接種后的上清液A3放入搖床25-28℃、150-200rpm震蕩 培養(yǎng)24-48小時(shí);培養(yǎng)完成后靜置30-60min，棄掉30ml上清液，取沉淀5ml接 種到上清液A2中繼續(xù)培養(yǎng);
步驟11、將步驟10接種后的上清液A2放入搖床25-28℃、150-200rpm震 蕩培養(yǎng)24-48小時(shí);培養(yǎng)完成后靜置30-60min，棄掉30ml上清液，取沉淀5ml 接種到上清液A1中繼續(xù)培養(yǎng);
步驟12、將步驟11接種后的上清液A1放入搖床25-28℃、150-200rpm震 蕩培養(yǎng)24-48小時(shí);培養(yǎng)完成后靜置30-60min，棄掉30ml上清液，當(dāng)樣品經(jīng)過 上清液A1馴化培養(yǎng)后，取沉淀5ml，接種到上清液B3中;
步驟13、將步驟12接種后的上清液B3入搖床25-28℃、150-200rpm震蕩 培養(yǎng)48-72小時(shí);培養(yǎng)完成后靜置30-60min，棄掉30ml上清液，取沉淀5ml接 種到上清液B2中繼續(xù)培養(yǎng);
步驟14、將步驟13接種后的上清液B2入搖床25-28℃、150-200rpm震蕩 培養(yǎng)48-72小時(shí);培養(yǎng)完成后靜置30-60min，棄掉30ml上清液，取沉淀5ml接 種到上清液B1中繼續(xù)培養(yǎng);
步驟15、將步驟14接種后的上清液B1入搖床25-28℃、150-200rpm震蕩 培養(yǎng)48-72小時(shí);培養(yǎng)完成后靜置30-60min，棄掉30ml上清液，當(dāng)樣品經(jīng)過步 驟上清液B1馴化培養(yǎng)后，取沉淀1ml，接種到第3富集管中，將第3富集管的 管蓋擰緊，平放入搖床28-35℃、150-200rpm震蕩培養(yǎng)24-48小時(shí);培養(yǎng)后將第 3富集管冷藏或冷凍保存，此馴化后菌種為好氧馴化菌種。
說明書
煤制油廢水COD降解用菌種馴化試劑盒及馴化方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于一種菌種馴化試劑盒及馴化方法，特別涉及一種用于降解煤制油 廢水COD用菌種的馴化試劑盒及馴化方法。
背景技術(shù)：
煤制油是以煤炭為原料，通過化學(xué)加工過程生產(chǎn)油品和石油化工產(chǎn)品的一項(xiàng) 技術(shù)，包含煤直接液化和煤間接液化兩種技術(shù)路線。我國煤貯量占世界總貯量的 36%，占我國能源總量的70%以上，因此在我國，煤制油是燃料化工的主導(dǎo)。
煤制油生產(chǎn)過程中產(chǎn)生的含油廢水的特點(diǎn)是：多環(huán)芳烴和苯系物及其衍生 物、酚、硫等有毒物質(zhì)濃度高，可生化性差，是一種比較難處理的廢水。綜合廢 水中COD根據(jù)污水處理工藝不同一般在1000-5000mg/L左右。含油廢水的危害 主要表現(xiàn)在：油類物質(zhì)形成的薄膜漂浮在水面上，空氣中的氧就不能溶解于水中， 水中的溶解氧就會(huì)減少，致使水體中浮游生物等因缺氧而死亡，水生植物的光合 作用也受到限制，從而水體的自凈作用將會(huì)受到影響，水質(zhì)也會(huì)變臭，水資源的 利用價(jià)值也會(huì)遭到破壞，而且油中一些低沸點(diǎn)芳香烴化合物的存在會(huì)導(dǎo)致人類癌 癥的發(fā)生，從而影響人體健康。
目前國內(nèi)處理煤制油廢水的主要工藝路線基本遵行“預(yù)處理+生化處理+ 深度處理”，其中生化處理是污水處理工藝的重要階段。通過對(duì)國內(nèi)多個(gè)煤制油 企業(yè)的實(shí)地走訪，目前對(duì)于預(yù)處理后的煤制油廢水，一般采用缺氧、好氧生物法 處理(A/O工藝)。微生物是廢水生物處理過程的核心，制約著污水處理的效果。 在污水廠啟動(dòng)初期或運(yùn)行受到?jīng)_擊需要重新恢復(fù)運(yùn)行時(shí)，國內(nèi)普遍采用的方法是 向污水處理設(shè)施中投加污泥和營養(yǎng)物質(zhì)，或者投加市場(chǎng)上現(xiàn)有的專用微生物菌 劑，達(dá)到污水處理設(shè)施正常運(yùn)行的目的。對(duì)于煤制油廢水的處理，投加污泥和菌 劑的效果受到以下幾方面問題的制約：一、煤制油廢水中含有多種對(duì)微生物有毒 害作用的物質(zhì)，投加到污水中的污泥或菌種中的部分微生物容易被廢水中的毒性 物質(zhì)所抑制，為解決此問題往往需要對(duì)污泥或菌種在投加前進(jìn)行長(zhǎng)時(shí)間的馴化; 二、煤制油廢水中有大量油類等難降解有機(jī)物，這些物質(zhì)很難被微生物利用并降 解，解決這個(gè)問題通常需要工藝的合理設(shè)計(jì)與污泥或菌劑的馴化共同解決;三、 與普通污水相比，煤制油廢水處理設(shè)施的啟動(dòng)時(shí)間更長(zhǎng)，需要更長(zhǎng)時(shí)間的馴化。
發(fā)明內(nèi)容：
本發(fā)明的目的在于解決以上問題，提供一種菌種馴化試劑盒及馴化方法，經(jīng) 本試劑盒馴化后的菌種投放到煤制油廢水中，可以大大縮短污水處理啟動(dòng)時(shí)間， 提高COD降解效率。該馴化培養(yǎng)基具有較廣的適用性，通過其馴化后的菌種投入 到多個(gè)煤制油污水樣品后，其COD降解能力均有所提高。該試劑盒可以模擬缺氧、 好氧生物法工藝，可以應(yīng)用于煤制油污水處理菌劑的產(chǎn)品優(yōu)化，以及污水廠在運(yùn) 行前對(duì)污泥進(jìn)行快速馴化。
本發(fā)明的目的是通過以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的：一種煤制油廢水COD降解用菌種 馴化試劑盒，其特征在于：它是由富集管、馴化預(yù)制管A、馴化預(yù)制管B組成; 其中：
(一)、富集管：
富集管的制備：
(1)、取牛肉膏0.7-1.0g，蛋白胨0.7-1.0g，磷酸二氫鉀1.2-2.0g，磷 酸氫二鈉1.5-2.5g，用1L水溶解，以上培養(yǎng)基用濃度5%的碳酸鈉和5%HCl調(diào) pH至7.00-7.50，分裝到50ml螺口管中，每支管加入培養(yǎng)基20ml;分裝完畢 后，將螺口管蓋擰松，115℃滅菌25-30min，待滅菌結(jié)束并冷卻至室溫后，從滅 菌鍋中取出并擰緊管蓋，至此基礎(chǔ)富集管制備完成;
(2)、取苯酚10-13mg，萘酚2-4mg，喹啉1-2mg，甲醇0.08-0.12ml，丁醇 0.08-0.12ml，用100ml無菌水溶解，溶解后在無菌條件下用0.22μm無菌濾膜 過濾除菌;過濾除菌完成后，取2ml經(jīng)過過濾除菌的溶液，0.2-0.3μl煤制柴 油，在無菌條件下加入到步驟(1)中的基礎(chǔ)富集管中，在高速漩渦震蕩器上震 蕩5-10min，至此富集管制備完成;
(二)、馴化預(yù)制管A：
馴化預(yù)制管A的制備：
(1)、取牛肉膏0.4-0.7g，蛋白胨0.4-0.7g，丙三醇0.4-0.6ml，磷酸二 氫鉀1.2-2.0g，磷酸氫二鈉1.5-2.5g，用1L水溶解，以上培養(yǎng)基用濃度5%的 碳酸鈉和5%HCl調(diào)pH至7.50-8.00，分裝到50ml螺口管中，每支管加入培養(yǎng) 基30ml;分裝完畢后，將螺口管蓋擰松，115℃滅菌25-30min，待滅菌結(jié)束并 冷卻至室溫后，從滅菌鍋中取出并擰緊管蓋，至此基礎(chǔ)馴化預(yù)制管A制備完成;
(2)、取苯酚18-22mg，萘酚8-12mg，喹啉4-6mg，苯胺4-6mg，吡啶0.4-0.6mg， 辛基十二烷醇0.1-0.2mg，用100ml無菌水溶解，溶解后在無菌條件下用0.22 μm無菌濾膜過濾除菌，過濾除菌后的溶液為水添加物A;
(3)、取萘130-170mg，甲苯3-7mg，鄰苯二甲酸二丁酯2-3mg，苯并咪唑 2-3mg，甲醇0.08-0.12ml，丁醇0.08-0.12ml，用100ml75%乙醇溶解，此溶液 為醇添加物A;
(4)、分別取水添加物A3ml，醇添加物A0.012ml，煤制柴油1.0-1.2μl， 在無菌條件下裝到步驟(1)中的基礎(chǔ)馴化預(yù)制管A中，在高速漩渦震蕩器上震 蕩5-10min，至此馴化預(yù)制管A制備完成;
(三)、馴化預(yù)制管B：
馴化預(yù)制管B的制備：
(1)、取牛肉膏0.2-0.4g，蛋白胨0.2-0.4g，丙三醇0.6-0.8ml，磷酸二 氫鉀1.2-2.0g，磷酸氫二鈉1.5-2.5g，用1L水溶解，以上培養(yǎng)基用濃度5%的 碳酸鈉和5%HCl調(diào)pH至7.50-8.00，分裝到50ml螺口管中，每支管加入培養(yǎng) 基30ml;分裝完畢后，將螺口管蓋擰松，115℃滅菌25-30min，待滅菌結(jié)束并 冷卻至室溫后，從滅菌鍋中取出并擰緊管蓋，至此基礎(chǔ)馴化預(yù)制管B制備完成;
(2)、取苯酚150-170mg，萘酚18-22mg，喹啉9-12mg，苯胺10-12mg，吡 啶0.9-1.2mg，辛基十二烷醇0.4-0.6mg，用100ml無菌水溶解，溶解后在無菌 條件下用0.22μm無菌濾膜過濾除菌，過濾除菌后的溶液為水添加物B;
(3)、取萘540-560mg，甲苯18-22mg，鄰苯二甲酸二丁酯8-12mg，苯并咪 唑8-12mg，甲醇1.8-2.2ml，丁醇1.8-2.2ml，用100ml75%乙醇溶解，此溶液 為醇添加物B;
(4)、分別取水添加物B3ml，醇添加物B0.012ml，煤制柴油3.0-4.0μl， 在無菌條件下裝到步驟(1)中的基礎(chǔ)馴化預(yù)制管B中，在高速漩渦震蕩器上震 蕩5-10min，至此馴化預(yù)制管B制備完成。
一種采用煤制油廢水COD降解用菌種馴化試劑盒馴化方法，其特征在于：包 括以下步驟：
(一)、缺氧階段馴化：
步驟1、將待馴化樣品取1-3ml接種到第1富集管中，將第1富集管的管蓋 擰緊，平放入搖床28-35℃、150-200rpm震蕩培養(yǎng)24-48小時(shí);
步驟2、取經(jīng)第1富集管培養(yǎng)的樣品5ml，接種到第1馴化預(yù)制管A中，將 第1富集管連同管內(nèi)剩余樣品放入4℃冷藏;
步驟3、將第1馴化預(yù)制管A的管蓋擰緊，平放入搖床25-30℃、100-150rpm 震蕩培養(yǎng)24-48小時(shí);培養(yǎng)完成后靜置30-60min，取上清液A130ml放入100ml 經(jīng)過滅菌的第1三角瓶中，然后放入4℃留存;取沉淀5ml接種到第2馴化預(yù) 制管A中繼續(xù)培養(yǎng);
步驟4、將第2馴化預(yù)制管A的管蓋擰緊，平放入搖床25-30℃、100-150rpm 震蕩培養(yǎng)24-48小時(shí);培養(yǎng)完成后靜置30-60min，取上清液A230ml放入100ml 經(jīng)過滅菌的第2三角瓶中，然后放入4℃留存;取沉淀5ml接種到第3馴化預(yù) 制管A中繼續(xù)培養(yǎng);
步驟5、將第3馴化預(yù)制管A的管蓋擰緊，平放入搖床25-30℃、100-150rpm 震蕩培養(yǎng)24-48小時(shí);培養(yǎng)完成后靜置30-60min，取上清液A330ml放入100ml 經(jīng)過滅菌的第3三角瓶中，然后放入4℃留存;當(dāng)樣品經(jīng)過步驟4的第3馴化 預(yù)制管A培養(yǎng)后，取沉淀5ml，接種到第1馴化預(yù)制管B中;
步驟6、將步驟5的第1馴化預(yù)制管B的管蓋擰緊，平放入搖床25-28℃、 100-150rpm震蕩培養(yǎng)48-72h;培養(yǎng)完成后靜置30-60min，取上清液B130ml放 入100ml經(jīng)過滅菌的第4三角瓶中，然后放入4℃留存;取沉淀5ml接種到第2 馴化預(yù)制管B中繼續(xù)培養(yǎng);
步驟7、將步驟6的第2馴化預(yù)制管B的管蓋擰緊，平放入搖床25-28℃、 100-150rpm震蕩培養(yǎng)48-72h;培養(yǎng)完成后靜置30-60min，取上清液B230ml放 入100ml經(jīng)過滅菌的第5三角瓶中，然后放入4℃留存;取沉淀5ml接種到第3 馴化預(yù)制管B中繼續(xù)培養(yǎng);
步驟8、將步驟7的第3馴化預(yù)制管B的管蓋擰緊，平放入搖床25-28℃、 100-150rpm震蕩培養(yǎng)48-72h;培養(yǎng)完成后靜置30-60min，取上清液B330ml放 入100ml經(jīng)過滅菌的第6三角瓶中，然后放入4℃留存;當(dāng)樣品經(jīng)過步驟7的 第3馴化預(yù)制管B培養(yǎng)后，取沉淀1ml，接種到第2富集管中，將第2富集管的 管蓋擰緊，平放入搖床28-35℃、150-200rpm震蕩培養(yǎng)24-48小時(shí);培養(yǎng)后將第 2富集管冷藏或冷凍保存，此馴化后菌種為缺氧馴化菌種;
(二)、好氧階段馴化：
步驟9、當(dāng)樣品經(jīng)過步驟5的第3馴化預(yù)制管A培養(yǎng)完成后，將冷藏的第1 富集管取出并恢復(fù)室溫;待恢復(fù)室溫6-10h后，取5ml接種到上清液A3中;
步驟10、將步驟9接種后的上清液A3放入搖床25-28℃、150-200rpm震蕩 培養(yǎng)24-48小時(shí);培養(yǎng)完成后靜置30-60min，棄掉30ml上清液，取沉淀5ml接 種到上清液A2中繼續(xù)培養(yǎng);
步驟11、將步驟10接種后的上清液A2放入搖床25-28℃、150-200rpm震 蕩培養(yǎng)24-48小時(shí);培養(yǎng)完成后靜置30-60min，棄掉30ml上清液，取沉淀5ml 接種到上清液A1中繼續(xù)培養(yǎng);
步驟12、將步驟11接種后的上清液A1放入搖床25-28℃、150-200rpm震 蕩培養(yǎng)24-48小時(shí);培養(yǎng)完成后靜置30-60min，棄掉30ml上清液，當(dāng)樣品經(jīng)過 上清液A1馴化培養(yǎng)后，取沉淀5ml，接種到上清液B3中;
步驟13、將步驟12接種后的上清液B3入搖床25-28℃、150-200rpm震蕩 培養(yǎng)48-72小時(shí);培養(yǎng)完成后靜置-60min，棄掉30ml上清液，取沉淀5ml接 種到上清液B2中繼續(xù)培養(yǎng);
步驟14、將步驟13接種后的上清液B2入搖床25-28℃、150-200rpm震蕩 培養(yǎng)48-72小時(shí);培養(yǎng)完成后靜置30-60min，棄掉30ml上清液，取沉淀5ml接 種到上清液B1中繼續(xù)培養(yǎng);
步驟15、將步驟14接種后的上清液B1入搖床25-28℃、150-200rpm震蕩 培養(yǎng)48-72小時(shí);培養(yǎng)完成后靜置30-60min，棄掉30ml上清液，當(dāng)樣品經(jīng)過步 驟上清液B1馴化培養(yǎng)后，取沉淀1ml，接種到第3富集管中，將第3富集管的 管蓋擰緊，平放入搖床28-35℃、150-200rpm震蕩培養(yǎng)24-48小時(shí);培養(yǎng)后將第 3富集管冷藏或冷凍保存，此馴化后菌種為好氧馴化菌種。
本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)和有益效果是：
該試劑盒是通過本實(shí)驗(yàn)室在全國大量采集煤制油廢水樣品，對(duì)廢水成分進(jìn)行 分析，并通過實(shí)驗(yàn)配制出了一種具有廣泛適用性的可以模擬真實(shí)污水的煤制油廢 水菌種馴化培養(yǎng)基，并以此為基礎(chǔ)形成了試劑盒，經(jīng)過其馴化的菌種，可以作為 高效煤制油廢水COD處理菌劑或污泥，提高菌種在廢水中的適應(yīng)能力，縮短污水 處理啟動(dòng)時(shí)間。
